抗雄激素物质对去势大鼠联合作用的实验研究

 目的：通过对邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）和烯菌酮（VZ）抗雄激素作用的单独效应实验，筛选毒效应敏感指标，并阐明其剂量反应关系；探讨三种抗雄激素物质的联合作用及其模式。
方法：本研究分两步进行。
第一步：DEHP、DBP和VZ抗雄激素作用的单独效应和剂量-反应关系研究方法。选择6周龄雄性SD大鼠168只，分三批次分别观察DEHP、DBP和VZ抗雄激素作用，每批次56只，随机分为8组，每组7只。
（1）DEHP毒理学实验：剂量分别为0、35、70、150、250、500、1 000 mg/kg bw；阳性对照用氟他胺3.0 mg/kg bw，灌胃，连续10 d。
（2）DBP毒理学实验：剂量分别为0、70、150、250、500、750、1 000 mg/kg bw；阳性对照用氟他胺3.0 mg/kg bw，灌胃，连续10 d。
（3）VZ毒理学实验：剂量分别为0、6、12、25、50、75、100 mg/kg bw；阳性对照用氟他胺3.0 mg/kg bw，灌胃，连续10 d。
灌胃前各组均皮下注射丙酸睾酮（TP）。试验结束后测定雄激素依赖性组织器官（阴茎头、腹侧前列腺、精囊、肛提肌-海绵体肌、尿道球腺）重量和血清中睾酮、黄体生成素水平。根据实验结果获取三种受试物的抗雄激素作用的关键指标及其未观察到有害作用剂量水平（NOAEL）和观察到有害作用最低水平（LOAEL）；利用基准计量法分别拟合三种受试物对不同靶器官影响的剂量-反应关系，同时计算各受试物不同指标作用的基准剂量（BMD）和基准剂量下限（BMDL）。
第二步 DEHP、DBP、VZ抗雄激素作用的联合作用及其模式研究。按2×2×2析因设计方案，将去势SD大鼠按照体重随机分为8组（7只/组）：1个阴性对照组，7个染毒组。染毒组剂量使用DEHP、DBP、VZ单独暴露抗雄激素作用的LOAEL（分别为250、500、12 mg/kg），染毒方法和检测指标同第一步。采用“2×2×2析因设计”方差分析法和“剂量相加法”研究DEHP、DBP和VZ抗雄激素作用的联合作用及其模式。
结果：第一部分 DEHP、DBP和VZ抗雄激素作用的单独效应和剂量-反应关系的研究结果。
（1）DEHP中高剂量组（250、500、1000 mg/kg bw）腹侧前列腺、肛提肌-海绵体肌、尿道球腺重量低于阴性对照，有统计学意义（P<0.05）；
（2）DBP中高剂量组（500、750、1000 mg/kg bw）肛提肌-海绵体肌、尿道球腺重量低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；
（3）VZ在5个剂量组（12、25、50、75、100 mg/kg bw）精囊、肛提肌-海绵体肌、尿道球腺重量低于对照，差异有统计学意义（P<0.05）。
基准剂量分析显示，DEHP、DBP和VZ对各雄激素依赖性组织器官的影响具有剂量-反应关系，Hershberger试验指出，如果剂量组中两个或两个以上的组织器官重量出现显著减少时，可以认为实验结果呈阳性，即受试物具有抗雄激素作用，以此为依据得出三种物质抗雄激素作用的基准剂量下限分别为150.38、276.78和3.50 mg/kg.bw。DEHP、DBP和VZ对去势大鼠的体重和血清激素含量的影响，差异均无统计学意义（P>0.05）。
第二部分 DEHP、DBP、VZ抗雄激素联合作用及其模式研究结果。DEHP和DBP联合染毒对肛提肌-海绵体肌的影响为拮抗作用；DBP和VZ联合染毒对阴茎头、腹侧前列腺、肛提肌-海绵体肌、尿道球腺重量的影响均为拮抗作用；其他的联合作用模式均为简单相加作用。“剂量相加法”分析发现，以尿道球腺为作用终点，DEHP和DBP、DBP和VZ联合作用模式为拮抗作用；其他的联合作用模式均为简单相加作用。
结论：雄激素依赖性组织器官对DEHP、DBP和VZ作用均有阳性表现，肛提肌-海绵体肌、尿道球腺较其他指标敏感。DEHP、DBP和VZ对雄激素依赖性组织器官的影响具有剂量-反应关系，三种物质抗雄激素作用LOAEL分别为250、500和12 mg/kg bw，基准剂量下限分别为150.38、276.78和3.50 mg/kg.bw。
DEHP、DBP和VZ共同暴露表现出联合抗雄激素作用，基于所有雄激素依赖性组织器官重量指标的“2×2×2析因设计”方差分析和基于尿道球腺重量指标的“剂量相加分析”均表明联合作用模式以简单相加和拮抗作用为主。
关键词：邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯；邻苯二甲酸二丁酯；烯菌酮；Hershberger试验；抗雄激素作用；基准剂量；析因设计；剂量相加；联合作用模式。
前言
环境和食品中的抗雄激素物质是一类内分泌干扰物（Endocrine-disrupting chemicals, EDCs），可以引起雄性动物生殖系统的发育以及功能异常，包括尿道下裂、隐睾发生率增高，肛殖距（生殖器与肛门距离）缩短，睾丸和附睾萎缩，精液量和精子数减少，精子活动度降低，精子畸形率升高等[[[]朱威,朱心强.农药的抗雄激素作用及其机制[J].国外医学卫生学分册,2005, 32(1): 14-19.]]。雄激素生物学作用的发挥是通过其与靶细胞胞浆内雄激素受体（Androgenreceptor, AR）结合来活化受体，进而诱导基因的转录活化及表达，从而发挥生物学效应的[[[]Chang CY, Mc Donnell DP. Androgen receptor cofactor interactions as targets for new drug discovery[J]. Trends Pharmacol Sci, 2005, 26(5): 225-228.],[[]Heemers H V, Tindall D J. Androgen receptor coregulators: a diversity of functions converging on and regulating the Ar transcriptional complex[J]. Endocr Rev, 2007, 28(7): 778-808.]]。研究显示，多数抗雄激素物质是通过干扰雄激素生理作用过程来抑制雄激素生物学效应的发挥，例如：Kelce等[[[]Kelce WR, Lambright CR, Gray Le Jr, et al. Vinclozolin and p, p'-DDE alter androgen-dependent gene expression: in vivo confirmation of an androgen receptor-mediated mechanism[J]. Toxicol Appl Pharmacol, 1997, 142(1): 192-200.]]研究表明抗雄激素物质可以通过影响共调节因子（AR活化之后在一系列的共调节因子作用下形成同源二聚体，进而与靶基因结合[2,3]）来抑制靶基因的转录。另外，抗雄激素物质还可以通过干扰下丘脑-垂体-性腺轴上的某些环节（如，雄激素的合成、分泌、激活、代谢等）来发挥抗雄激素作用，例如：Maitra SK等[[[]Maitra SK, Mitra A. Testicular Testicular Testicular Testicular functions and serum titers of LH and testosterone in methyl parathion-fed roseringed parakeets.Ecotoxicology and Environmental Safety, 2008, 71(1): 236-244.]]研究表明，甲基对硫磷能降低下丘脑-垂体-性腺轴中促性腺激素的分泌，导致雄激素水平下降而产生抗雄激素作用。
联合作用是指同时或者先后暴露于两种及以上外源性化合物下对生物体产生的毒效应[[[]Yanagiba Y, Ito Y, Yamanoshita O, et al. Styrene trimer may increase thyroid hormone levels via down-regulation of the aryl hydrocarbon receptor (AhR) target gene UDP-glucuronosyltransferase[J]. Environ Health Perspect, 2008. 116(6): 740-745.]]，包括协同作用、简单相加、拮抗作用。研究表明，相比于暴露在一种化合物下，人体同时或者先后暴露于同类化合物下可能引起更高或者更低的联合作用[[[]COT ( UK Committee on Toxicity of Chemicals in Food, Consumer Products and the Environment)． Risk assessment of mixtures of pesticides and similar substances ［EB/OL］． (2002-09-01)［2015-03-01］．http∥cot. food. gov. uk/pdfs/ reportindexed. Pdf.]]。但是，目前95%的毒理学研究是针对单种化学物质的[[[]RSH, Y., Toxicology of Chemical Mixtures: Case Studies, Mechanisms, and Novel Approaches 1994: London: Acadamic Press.]]，对内分泌干扰物的研究也是如此。由于缺乏联合作用方面的研究资料，限制了对这类物质共同存在时实际毒性和健康风险的科学评价。
近年来，邻苯二甲酸酯类物质（Phthalate esters, PAEs）的内分泌干扰作用逐渐成了国内外的研究热点。在我国，邻苯二甲酸二(2-乙基）己酯（Diethylhexyl phthalate,DEHP）和邻苯二甲酸二丁酯（Dibutyl phthalate, DBP）的使用量占增塑剂的前两位[[[]张蕴晖,陈秉衡,训城,等. DBP, DEHP及其代谢物MBP, MEHP的体内雌激素样活性分析[J].环境与职业医学,2005,22(1):11-13.]]，在食品包装材料、器皿、医疗用品、化妆品以及人造革等方面都被广泛应用[[[]Joffe M. Are problems with male reproductive health caused by endocrine disruption [J].Occup Environ Med,2001,58(4):281-287.]-[[]赵文红,厉曙光. VitC、VitE对DEHP致果蝇脂质过氧化的拮抗作用[J].同济大学学报医学版,2003,24(3):179-181.]]。2012年和2013年发生台湾塑化剂事件和大陆白酒检出塑化剂事件，这两种物质是主要检出物质，其毒性和健康风险备受关注。已有研究表明，DEHP、DBP具有不同程度的神经毒性、生殖毒性、发育毒性、免疫毒性、胚胎毒性等毒效应[[[]Ilona Q, Madeleine R B, Margot V B. The dynamics of autism spectrum disorders: how neurotoxic compounds and neurotransmitters interact [J]． Environ Res Public Health, 2013, 10(8): 3384-3408.]-[[]罗芬兰,蔡文琴,张吉强.大鼠孕期染邻苯二甲酸二丁酯对子代神经干细胞增殖分化的影响[J].第三军医大学学报,2010,32(11):1188-1191.]]。也有研究资料提示该类物质具有抗雄激素作用[[[]Howdeshell K L, Wilson V S, Furr J, et al. A mixture of five phthalate esters inhibits fetal testicular testosterone production in the Sprague-dawley rat in a cumulative, dose-additive manner [J]. Toxicological Sciences, 2008,105(1):153-165.]-[[]Carbone S, Samaniego YA, Cutrera R, et al. Different effects by sex on hypothalamic-pituitary axis of prepubertal offspring rats produced by in utero and lactational exposure to di-(2-ethylhexyl) phthalate ( DEHP) [J]. Neurotoxicology, 2012,33(1): 78-84.]]。
烯菌酮（Vinclozolin, VZ）又称乙烯菌核利，是一种广谱的保护性和接触性杀虫剂，由德国BASF公司于1975年开发成功。VZ能有效的阻止病菌孢子萌发后的芽管生长，对果树、蔬菜上的褐斑、灰霉、菌核病有良好的防效作用，因此在蔬菜、水果的生产过程中应用广泛。VZ的代谢产物半衰期较长，农业生产中施用的VZ可迁移到地表水中，几周甚至数月后仍能检测到[[[]United States Environmental Protection Agency ( US EPA). Reregistration Eligibility Decision for Vinclozolin [R]. Washington DC: Office of Prevention. Pesticides and Toxic Substances, 2000.]]，对环境和生物体健康构成威胁。多项研究表明[4,[[]Kang IH, Kim HS, Shin JH, et al. Comparison of anti-androgenic activity of flutamide, vinclozolin, procymidone, linuron, and p, p'-DDE in rodent 10-day Hershberger assay[J]. Toxicology, 2004,199(2-3): 145-159.]]，烯菌酮具有明显的抗雄激素作用。
但上述三种物质联合暴露时的的抗雄激素作用模式尚不清楚。本研究针对EDCs联合作用模式，以DEHP、DBP和VZ为模式化合物，以去势SD大鼠为模型。先筛选出三种化合物抗雄激素作用的敏感指标；然后分别建立基于敏感指标的剂量-反应关系，并确定相应的毒理学参考值；最后，利用“析因设计方差分析”和“剂量相加法”分析三种化合物的联合作用模式，为探明EDCs的联合作用模式及累计风险评估方法学研究提供基础数据。

第一部分DEHP、DBP、VZ抗雄激素作用剂量-反应关系研究
随着医药、化学、食品等工业的发展及环境污染物的长期累积，多种EDCs进入食品已成为不争的事实。邻苯二甲酸酯类物质（如DEHP、DBP）、抗菌剂（如VZ）等EDCs在多种食品中均有检出[[[]Behr M, Oehlmann J, Wagner M. Estrogens in the daily diet: in vitro analysis indicates that estrogenic activity is omnipresent in foodstuff and infant formula[J]. Food Chem Toxicol. 2011, 49(10): 2681-2688.]]。现有研究表明，DEHP、DBP、VZ均表现出的内分泌干扰作用[[[]Howdeshell K L, Wilson V S, Furr J, et al. A mixture of five phthalate esters inhibits fetal testicular testosterone production in the Sprague-dawley rat in a cumulative, dose-additive manner [J]. Toxicological Sciences, 2008,105(1):153-165.]-[[]Matsuura I, Saitoh T, Ashina M, et al. Evaluation of a two-generation reproduction toxicity study adding endpoints to detect endocrine disrupting activity using vinclozolin [J]. The Journal of Toxicological Sciences.2005, 30: 163-188.]]，并且均是明确的具有抗雄激素作用的外源性化合物[[[]Lee BM, Koo HJ.Hershberger Assay for Anti-androgenic Effects of Phthalates. Journal of Toxicology and Environmental Health A[J]. 2007,70(15-16): 1365-1370.]-[[]Uzumcu M, Suzuki H, Skinner M K. Effect of the anti-androgenic endocrine disruptor vinclozolin on embryonic testis cord formation and postnatal testis development and function[J]. Reproductive toxicology, 2004, 18(6): 765-774.]]。虽然，它们的作用机制不同，但是其表现出的抗雄激素作用对特定靶器官及作用终点有相同的影响，如抑制雄性大鼠雄激素依赖性组织器官的生长。但由于个实验所选的时间节点和效应终点不同，所以研究结果不一而论。
在研究不同物质的联合作用时，单个物质敏感指标的选择和剂量-反应关系的确定是进行剂量设计的关键。根据不同的研究目的，可以选择单个物质的未观察到有害作用剂量水平（No observed effect level, NOAEL）进行剂量组合，也可以选择单个物质表现出一定效应的剂量进行组合，如观察到有害作用最低水平（Lowest observed adverse effect level, LOAEL）或者特定水平的基准反应剂量。基准剂量（Benchmark does, BMD）需要利用基准剂量法对单个物质剂量-反应关系的全部数据进行分析获得，并拟合得到基准剂量下限（Benchmark does lower bound, BMDL）。BMDL是目前毒理学领域确定化学物毒理学参考点的最新方法，较传统的NOAEL更科学[[[]Rabovsky J, Fowles J, Hill MD, et al. A health risk benchmark for the neurologic effects of styrene: comparison with NOAEL/LOAEL approach[J]. Risk Anal, 2001. 21(1): 117-26.]]。
本研究参照经济合作与发展组织试验指南（OECD TG441）[[[]OECD. 2009a. OECD test guideline 441 Hershberger bioassay in rats: a short-term screening assay for (anti) androgenic properties. Available at:http://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-441-hershberger-bioassay-in-rats_9789264076334-en. Accessed November 14, 2013.]]，通过Hershberger试验研究DEHP、DBP、VZ的抗雄激素作用，分别确定其抗雄激素作用的毒性参考值NOAEL/LOAEL，同时利用基准剂量法分别分析其剂量-反应关系，并获得BMD和BMDL。为探讨DEHP、DBP和VZ的联合作用研究提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
DEHP、DBP、VZ、氟他胺（Flutamide，FT），均购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司；丙酸睾酮（Testosterone Propionate，TP），购自北京冠星宇科技有限公司；金龙鱼玉米胚芽油，购于丰益贸易（中国）私人有限公司；血清睾酮（Testosterone，T）、黄体生成素（Luteinizing Hormone， LH）放射免疫试剂盒，购于北京北方生物工程研究所；去豆类成分饲料（配方[[[]张晓鹏,李丽,张文众,等. 大豆异黄酮对不同发育期雌性大鼠生殖系统毒性作用的研究[J].中国食品卫生杂志, 2006, 18(6): 508-514.]]见表1-1），购于北京华阜康生物科技股份有限公司。
低速高速离心机，购于北京东南仪诚实验室设备有限公司；XH-6080伽马计数器，购于西安核仪厂；BiotekSynergy 4多功能酶标仪，购于基因有限公司；BS423S电子天平，购于赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。
表1-1 去豆类成分饲料配方
Table 1-1 Ingredients of soy-and alfalfa-free diet
成分 含量（%）
玉米面（ground corn） 30.56
小麦粉（ground wheat） 27.27
配方鱼粉（60%）（fish meal(60%)） 10.00
粗小麦（wheat middlings） 10.00
酪蛋白（casein lactic） 7.00
脱脂奶粉（dried skim milk） 5.00
玉米蛋白（60%蛋白）（corn gluten meal(60%)） 3.00
玉米油（corn oil） 2.00
酵母（brewers yeast） 2.00
AIN矿物盐 3.00
维生素预混物 0.05
氯化胆碱（60%活性成分）（choline chloride(60%)） 0.12
总计 100.00

1.2 试验动物
SPF级6周龄Sprague Dawley（SD）雄性大鼠共168只（通过3批试验完成，每批次56只），体重190-210g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司[生产许可证：SCXK（京）2012-0009]，饲养于中国疾病预防控制中心动物实验室[实验动物许可证号：SYXK（京）2009-0032]。饲养条件：温度为20-24℃、湿度为40-70%、动物照度15-20LX、换气次数≥15次/h、12h昼夜交替、空气清洁度7级、噪声dB（A）≤60。
1.3 方法
1.3.1 动物分组与处理
SD大鼠适应性喂养3天，确保用于实验的动物活动、生长正常，然后进行去势手术（通常SD大鼠在出生后前42d包皮与阴茎没有完全分离，所以去势手术要在地42d或之后进行[30]）。手术前先腹腔注射2%的戊巴比妥钠（3ml/kgbw）对大鼠进行麻醉，待大鼠进入麻醉状态后，在大鼠阴囊中间部位剪开一道小切口，用血管结扎的方法摘除睾丸和附睾，此外还要切除输精管。动物止血后用酒精擦洗切口，并用缝合针缝合阴囊。手术工具全部提前消毒处理，全程严格按照规范操作。
术后恢复1周，将每批次大鼠按照体重进行随机数表法分组，分8组（7只/组）：
每批阴性对照组（Negative control, NC）1个：灌胃给予玉米油，灌胃量为5ml/kgbw（下同）；
每批阳性对照组（Positive control, PC）1个：灌胃给予3mg/kg bw的FT；
第一批实验组：DEHP实验组6个，分别灌胃给予35、70、150、250、500、1000 mg/kg bw的DEHP；第二批实验组：DBP实验组6个，分别灌胃给予70、150、250、500、750、1000 mg/kg bw的DBP；第三批实验组：VZ实验组6个，分别灌胃给予6、12、25、50、75、100 mg/kg bw的VZ；
各组大鼠灌胃前30min均皮下注射0.2mg/kg bw的TP（皮下注射量为0.5ml/kg）。连续给药10d，期间每隔24小时称重且记录，并以体重调整灌胃量。试验期间2只/笼饲养，饲喂以去豆类成分饲料。
1.3.2 器官称量并固定
最后一次给药24h后称量大鼠体重，并用2%戊巴比妥钠麻醉。待大鼠进入麻醉状态后，将其解剖，经腹主动脉采血后，取5个雄激素依赖性器官：阴茎头、腹侧前列腺、精囊、肛提肌-海绵体肌、尿道球腺，以及肝脏、肾脏、肾上腺称重（精确到0.001g），称重后把雄激素依赖性器官放入中性10%福尔马林溶液中固定。计算肝脏、肾脏、肾上腺的脏器系数，脏器系数公式为：

1.3.3 血清睾酮、黄体生成素检测
采用放免法检测血清中睾酮（T）和黄体生成素（LH）含量，具体操作程序依照相应试剂盒说明规程进行。
1.3.4 组织病理学检查
将组织脱水透明处理后，进行常规石蜡包埋和切片操作，然后用二甲苯脱蜡，分别用梯度95%、90%、80%、70%酒精浸泡后用蒸馏水冲洗，使用苏木素伊红染色，中性树胶封片完成后，在光学显微镜下对切片进行观察。
1.4 统计分析方法
1.4.1 各组间均值比较
实验结果以表示，应用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），方差齐时两两比较用Dunnett法，方差不齐时两两比较用Dunnett’sT3法，检验水准α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。
1.4.2 相关性检验
应用SPSS 19.0软件进行两变量线性相关分析，检验水准α=0.05，P<0.05为通过显著性检验。
1.4.3 BMD法拟合剂量-反应关系
使用基准剂量软件（Benchmark does software，BMDS）2.6.0中文版（国家食品安全风险评估中心）分别拟合DEHP、DBP、VZ对雄激素依赖性组织器官重量的剂量-反应关系，具体步骤如下：
1.4.3.1 选择可以纳入BMD分析的指标
参照欧洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）和美国环保署(Environmental Protection Agency, EPA)的BMD规程，确定数据的纳入/排除标准：1）通过剂量-反应关系检验，确定具有良好剂量-反应关系的数据，检验水准设为0.05（即当剂量-反应关系检验P1<0.05时，则存在明显的剂量-反应关系）；2）排除所有剂量组效应与对照组效应差异无统计学意义的指标[[[]EFSA, Guidance of the scientific committee on a request from European Food Safety Authority (EFSA) on the use of the benchmark dose approach in risk assessment.The EFSA Journal, 2009. 1150: 1-72. Agency, E.P. Benchmark Dose (BMD) Methodology. 2012 Dec. 30, 2012; Available from: http://www.epa.gov. ],[[]Agency, E.P. Benchmark Dose (BMD)Met,hodology. 2012 Dec. 30, 2012; Available from: http://www.epa.gov.]]。
1.4.3.2 选择合适的基准反应（Benchmark response, BMR）类型
本实验中的雄激素依赖性组织器官重量指标为连续性变量。对于连续性变量，BMDS给出的默认 BMR类型为标准差（Standard deviation, SD）[33]。
1.4.3.3 选择适宜模型拟合数据
依据指标性质（连续型变量/分类变量），选择适宜模型。本实验数据均为连续型变量，可选的五种模型分别为：指数模型（exponential model）、希尔模型（hill model）、线性模型（linear model）、多项式模型（Polynomial model）和幂模型（power model）。将每项指标的各剂量组均值、标准差和样本量纳入模型进行拟合。模型置信限设为0.10（即当模型的拟合优度检验P2值高于0.10，接受模型）[33]。
1.4.3.4 选择最优模型及其确定BMD和BMDL值
当每项指标的模型拟合结果中有两个以上模型的拟合优度检验P2值大于0.10时，使用最小信息量准则（Akaike information criterion, AIC）选择最优模型，即选用AIC值最小的模型。
Hershberger试验指出，如果剂量组中两个或两个以上的组织器官重量出现显著减少时，可以认为实验结果呈阳性，即受试物具有抗雄激素作用。因此，选择使得两个指标出现显著减少的BMD和BMDL作为抗雄激素作用的参考剂量值。

2 结果
2.1 一般观察和动物体重大鼠去势后恢复良好，活动和进食正常。
2.1.1DEHP受试物批各组大鼠在受试前、受试后体重以及各组增重间差异均无统计学意义（P>0.05）。结果见表1-2。
表1-2 DEHP对大鼠体重的影响 ()
Table 1-2 The influence of DEHP on body weight change of rats
受试物 分组 受试前 受试后 增重
DEHP NC组 261.1±8.0 328.5±14.5 67.4±7.2
35 mg/kg bw剂量组 257.8±4.7 327.3±11.5 69.4±9.2
70 mg/kg bw剂量组 261.9±6.4 332.1±7.8 70.2±8.1
150 mg/kg bw剂量组 259.1±9.5 333.8±12.3 74.7±5.2
250 mg/kg bw剂量组 258.7±7.5 331.6±17.7 72.9±11.3
500 mg/kg bw剂量组 256.1±9.9 329.4±22.7 73.3±13.9
1000 mg/kg bw剂量组 258.7±12.8 324.1±12.5 65.4±5.5
PC组 262.4±11.3 328.1±13.4 65.7±5.1
方差分析统计量F（F0.05(7，48)=2.21） 0.66 1.12 1.27
2.1.2 DBP受试物批各组大鼠在受试前、受试后体重以及各组增重间差异均无统计学意义（P>0.05）。结果见表1-3。
表1-3 DBP对大鼠体重的影响 ()
Table 1-3 The influence of DBP on body weight change of rats
受试物 分组 受试前 受试后 增重
DBP NC组 253.0±10.5 325.4±18.1 72.5±10.9
70 mg/kg bw剂量组 253.0±15.3 324.9±20.2 70.1±7.1
150 mg/kg bw剂量组 251.2±5.8 322.7±9.1 71.5±5.5
250 mg/kg bw剂量组 253.9±12.8 328.2±19.3 74.3±9.8
500 mg/kg bw剂量组 250.4±13.3 320.4±19.4 70.0±11.6
750 mg/kg bw剂量组 248.1±9.7 321.5±13.1 73.4±7.4
1000 mg/kg bw剂量组 254.5±11.3 324.1±13.9 69.6±6.9
PC 组 252.3±10.9 319.5±12.9 68.2±4.9
方差分析统计量F（F0.05(7，48)=2.21） 0.82 1.47 2.01
2.1.3VZ受试物批各组大鼠在受试前、受试后体重以及各组增重间差异均无统计学意义（P>0.05）。结果见表1-4。
表1-4 VZ对大鼠体重的影响 ()
Table 1-4 The influence of VZ on body weight change of rats
受试物 分组 受试前 受试后 增重
VZ NC组 259.5±4.1 319.3±7.9 59.8±6.0
6 mg/kg bw剂量组 257.5±11.7 319.4±10.3 61.9±8.2
12 mg/kg bw剂量组 260.9±11.0 320.5±14.4 59.6±8.1
25 mg/kg bw剂量组 257.8±9.4 312.9±8.0 55.1±5.9
50 mg/kg bw剂量组 255.9±11.9 311.2±14.2 55.3±5.8
75 mg/kg bw剂量组 254.4±12.4 315.0±13.0 60.7±2.7
100 mg/kg bw剂量组 256.9±6.4 313.3±9.1 56.4±5.6
PC 组 254.4±10.1 314.8±16.0 60.3±9.9
方差分析统计量F（F0.05(7，48)=2.21） 0.63 1.40 2.09
2.2雄激素依赖性组织器官的重量及比较
2.2.1 DEHP腹侧前列腺、肛提肌-海绵体肌、尿道球腺表现敏感，在250、500和1000 mg/kg bw剂量组显示脏器重量降低，与NC组比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。阴茎头和精囊不够敏感，在1000 mg/kg bw剂量组的重量的减少才显示有统计学意义（P<0.05）。详见表1-5。
表1-5 DEHP对大鼠雄激素依赖性组织器官重量（mg）的影响()
Table 1-5 The influence of DEHP on androgen-dependent tissues weights of rats
分组 阴茎头 腹侧前列腺 精囊 肛提肌-海绵体肌 尿道球腺
NC组 75.3±3.7 118.4±27.7 344.5±78.7 490.1±78.6 36.0±4.2
35 mg/kg bw剂量组 71.4±4.5 108.3±17.7 337.0±23.0 421.0±41.7 32.0±5.2
70 mg/kg bw剂量组 71.4±2.8 117.1±21.8 381.3±44.1 451.5±84.6 36.4±9.6
150 mg/kg bw剂量组 70.4±6.3 104.7±19.0 373.9±56.0 435.3±58.0 33.4±4.8
250 mg/kg bw剂量组 70.1±6.2 95.7±14.6a 308.6±52.4 368.7±96.2a 25.6±2.6a
500 mg/kg bw剂量组 69.9±5.1 96.9±13.4a 349.1±67.5 392.0±53.5a 27.6±5.2a
1000 mg/kg bw剂量组 66.6±7.7a 82.6±17.5a 256.3±36.3a 339.7±84.4a 24.3±4.8a
PC 组 50.8±3.7a 37.4±16.7a 126.9±45.5a 163.1±27.4a 7.3±2.2a
方差分析统计量F 10.62 10.81 13.75 11.08 11.29
注：F0.05(7，48)=2.21，a表示与阴性对照组相比P<0.05